从浙江、上海、江苏、山东、河南、广西采集了26份表现双生病毒症状的番茄样品,利用双生病毒简并引物PA/PB扩增得到约500 bp的特异片段,经克隆测序确定所得番茄样品均感染双生病毒。在GenBank上比对分析表明,共检测到三种不同的病毒,即番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)、台湾番茄曲叶病毒(Tomato leaf curl Taiwan virus,ToLCTWV)以及中国番木瓜曲叶病毒(Papaya leaf curl China virus,PaLCuCNV)。所有分离物都没有发现伴随有卫星DNAβ分子或DNA B组份。对浙江、江苏及山东的TYLCV分离物进行了全序列测定,结果表明各地分离到的TYLCV分离物具有很高的序列同源性(＞98%),与TYLCV-IL[IL:Reo](X15656)的序列同源性均大于97%。通过对GenBank上TYLCV代表分离物全序列进行系统进化树分析,表明不同分离物之间序列同源性非常高,但是仍可以分为两大类群。其中侵染我国番茄的双生病毒分离物都属于第一类。对广西及河南的PaLCuCNV分离物进行了金序列测定,全序列长分别为2748(HeNZM1,FN256260)和2738(GX4,FN297834)nt。它们与PaLCuCNV-[CN:G2](AJ558123)的同源性为94.6%和89.3%,因此被命名为PaLCuCNV-[CN:HeNZM1]和PaLCuCNV-[cN:GX4]。在浙江温州的番茄样品中鉴定到了台湾番茄曲叶病毒(ToLCTWV),对ZJWZ5分离物进行了全序列克隆测序(2748 nt,FN256292)。它与ToLCTWV-[CN:ZJ16]分离物(AM698111)的同源性为99%,因此被命名为ToLCTWV-[CN:WZ5]。构建了侵染番茄的三类双生病毒(TYLCV、PaLCuCNV和ToLCTWV)的侵染性克隆,致病性测定表明,TYLCV-[CN:SH2]和PaLCuCNV-[CN:HeNZM1]侵染性克隆均可系统侵染本氏烟、三生烟、心叶烟、番茄、矮牵牛并表现明显症状,但不能侵染黄瓜、棉花、茄子及辣椒。此外,发现TYLCV能够与异源的DNAβ互作且诱导比病毒单独侵染更严重的症状。ToLCTWV-[CN:ZJ16]侵染性克隆能侵染番茄并产生叶片卷曲症状,但不能侵染本氏烟、三生烟及矮牵牛。当ToLCTWV-[CN:ZJ16]与异源的DNAβ共同接种时,发现除了在番茄上产生更严重的症状外,还能够侵染本氏烟、三生烟及矮牵牛并产生严重的症状。搜集了20个抗双生病毒的番茄抗性材料,利用已经报道的分子标记,初步分析这些材料携带抗病基因Ty-1、Ty-2和Ty-3。用TYLCV侵染性克隆对抗性材料进行抗性筛选,发现TYLCV接种后这些抗性材料的抗性表现差异很大,发病率与病毒含量并不相关。用生物信息学软件对侵染我国番茄的TYLCV、TYLCCNV、ToLCCNV、ToLCTWV、PaLCuCNV、TbCSV和TYLCTHV等双生病毒的基因组全序列进行了分析,选取三个保守区段并将其融合作为沉默的靶基因,构建植物表达载体pBin438-hp。将该载体转化番茄并获得转基因植株,经PCR验证得到34株转基因番茄植株,对病毒的抗性正在测定中。
